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圓二色光譜不斷走向諸多領域
  • 發布時間 : 2018-05-16 15:21:48
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圓二色光譜不斷走向諸多領域  
   圓二色光譜利用蛋白質的圓二色性及不對稱分子對左右圓偏振光吸收的不同來進行結構分析。蛋白質或多肽中主要的光活性基團是肽鍵、芳香氨基酸殘基及二硫鍵等,當平面圓偏振光的吸收不相同時,會產生吸收差值。由于這種吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圓偏振光變成了橢圓偏振光,即蛋白質的圓二色性。通過圓二色光譜,可以在一定程度上分析蛋白質、多肽樣品的二級結構和高級結構。
   圓二色光譜的供試品,大多數情況下的蛋白質和多肽。蛋白質的精確濃度是計算樣品二級結構的關鍵,一般要求樣品濃度為0.2μg/μl,濃度過高,測試時信號不好,需稀釋,樣品純度要在90%以上,不要添加任何保護劑或其它物質,樣品中應避免含有光吸收的雜質,緩沖劑和溶劑在配制溶液前最好做單獨的檢查,透明性極好的磷酸鹽可用作緩沖體系。圓二色光譜在遠紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質肽鍵的排布信息,計算所得的是蛋白質二級結構比例,即α-螺旋、β-折疊、轉角和不規則卷曲的比例。
   圓二色光譜在近紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質側鏈生色基團色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環境的變化。圓二色光譜技術能快速、簡單、較準確地研究溶液中蛋白質和多肽的構象,并且運用斷流、電化學等附加裝置,結合溫度、時間等變化參數,已經廣泛用于了解蛋白質-配體的相互作用,監測蛋白質分子在外界條件誘導下發生的構象變化,探討蛋白質折疊、失活過程中的熱力學與動力學等多方面的研究。
   圓二色光譜在遠紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質肽鍵的排布信息,計算所得的是蛋白質二級結構比例;圓二色譜在近紫外區的掃描圖譜,反映的是蛋白質側鏈生色基團色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等殘基的排布信息和二硫鍵微環境的變化。圓二色光譜用于拆分和估算的軟件不下十幾種,得到研究者廣泛認同的計算模式有幾種,但由于不同計算模式的理論基礎不同,所計算得到的蛋白質二級結構比例并不完全相同,但多數軟件對α-螺旋的估計還是比較準確的。
   圓二色光譜根據圓二色性的數據來推斷這些試劑對照相明膠的多級結構的影響。實驗結果表明:這些試劑對明膠的圓二色性的影響是很強烈的,不同試劑不僅影響的程度不一樣,而且影響的方式也不盡相同。比如:對明膠的240nm附近的負槽圓二色性的影響,在KCNS、脲的濃度的增大過程中圓二色性先是減小,經過一個最低值,然后濃度增大過程中,圓二色性一直是增大的。圓二色光譜在硫脲濃度增大的過程中,圓二色性卻是迅速減小的,很快就減小到零。不管上述助劑各自對明膠的圓二色性影響怎樣,但它們都有一個共同點,就是:改變或部分改變了明膠的多級結構。
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